C8反相液相色譜柱在液相色譜中是應(yīng)用zui廣泛的技術(shù)，主要是因為它適用于分析極大多數(shù)的非極性物質(zhì)和離子化合物。大多數(shù)用于反相色譜的固定相都是天然的疏水物質(zhì)，因此，分析物是按照它們與固定相的疏水相互作用的大小來分離的。
C8反相液相色譜柱的應(yīng)用，常利用各種流動相和添加物作用于反相色譜柱，添加物可以改變或修飾填料的表面，有時候還有可能會污染鍵合相表面；硅膠表面的疏水鍵合相是硅烷醇，殘留的硅烷醇存在于所有的硅膠鍵合填料中，這些硅烷醇具有弱酸性，因此能與某些待分析物反應(yīng)成為基質(zhì)成分。
1.C8反相液相色譜柱的平衡
C8反相液相色譜柱由工廠測試后是保存在乙腈/水中的。新柱應(yīng)先使用10－20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱。一定確保分析樣品所使用的流動相和乙腈/水互溶。每天用足夠的時間以流動相來平衡色譜柱，就會在處理問題方面獲得zui大的”補償”，而且C8反相液相色譜柱的壽命也會變得更長。
操作步驟：
a.平衡開始時將流速緩慢地提高，用反相液相色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對試劑流速如果較低，則需要較長的時間來平衡）
b.如果使用的流動相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水”過渡”即每天分析開始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動相平衡；分析結(jié)束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護柱子。
2.C8反相液相色譜柱的再生
長期使用的色譜柱，往往柱效會下降（柱子的理論塔板數(shù)減低）。可以對色譜柱進行再生，在有條件的實驗室應(yīng)使用一個廉價的泵進行柱子的再生。
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